Dr. Henriette Wolf (gespielt von Brigitte Kren) hat sich ihren Posten hart erarbeitet. Wer glaubt, er habe eine kleine, ältere Dame vor sich, die keiner Fliege was zuleide tun kann, irrt sich gewaltig. Denn die Chefin der SOKO Wien ist brillant darin, Regeln in ihrem eigenen Sinn auszulegen. So verschafft sie ihrem Team oft mehr Aktionsfreiheit. Auch wenn sie sich damit manchmal am Rande der Legalität befindet. Wenn Dr. Wolf genervt oder verärgert ist, findet man sie am Schießstand – denn das ist ihre große Leidenschaft, bei der sie sehr gut nachdenken kann. Das heißt aber auch: Wenn man sie dort findet, weiß man, dass etwas im Busch ist. Private Unterstützung findet Henriette bei ihrem Mann Kurti, der als Bildhauer oft zu Hause ist und ihr den Rücken freihalten kann.

Carl Ribarski (gespielt von Stefan Jürgens) ist ein Mann mit Grundsätzen: direkt, unbeugsam und leidenschaftlich. Er ist Polizist aus Überzeugung. Er glaubt an Zivilcourage, Verantwortung und den Mut zur Wahrheit. Er hat eine genaue Beobachtungsgabe, einen starken Willen und verfügt über extrem hohes Durchhaltevermögen. Sein ausgeprägter Gerechtigkeitssinn steht nicht immer im Einklang mit dem geltenden Recht.
Carl Ribarski stammt aus einer Kleinstadt im Ruhrgebiet, wächst in einer multikulturellen Umgebung auf, ist ein interessierter Schüler und als junger Mann ein aufgeschlossener Weltenbummler. Ständig auf der Suche nach neuen Erfahrungen, verschlug es ihn nach der Polizeiakademie zum Bundesnachrichtendienst, wo er sich schnell hoch arbeitete und vorwiegend im Alleingang auf schwierige und gefährliche Fälle angesetzt wurde. Seine Ostsprachenkenntnisse und seine hervorragenden Kontakte zum Balkan-Milieu verschlugen ihn schließlich in den Kosovo, wo er für den internationalen Gerichtshof Jagd auf ehemalige Kriegsverbrecher machte. Im Zuge einer Ermittlung kam es zu einem folgenschweren Zwischenfall, bei dem seine Partnerin - eine kanadische Polizistin - getötet wurde. Mit ihr verbanden ihn mehr als nur kameradschaftliche Gefühle. Carl Ribarski wurde aus dem Kosovo abgezogen und für unbestimmte Zeit nach Wien versetzt.

Vor etwa zehn Jahren beendete Klaus Lechner (gespielt von Andreas Kiendl) seine Arbeit bei der SOKO Kitzbühel, um mit seiner Frau eine Familie in seiner Heimat, der Steiermark, zu gründen. Doch die Ehe scheiterte. Dann ist Klaus seiner Ex-Frau nach Wien gefolgt, um sein Kind regelmäßig zu sehen.
Als großer Menschenfreund kann sich der typische Steirer empathisch mit Opfern, Zeugen und Verbrechern identifizieren und bringt sie durch seine geduldige, aufmerksame Art dazu, ihre Eigenarten und Motive zu offenbaren. Trotz eines ausgeprägten Gerechtigkeitssinnes ist er nicht immer glücklich über den Ausgang seiner Ermittlungen und kann auch für einen überführten Mörder noch Verständnis aufbringen.
Seine Abneigung gegenüber klassischen „Männerdingen“, wie Autos oder Waffen, machen ihn im Machoverein Polizei manchmal zum Außenseiter, womit Klaus aber kein Problem hat. Er hat eine natürliche Autorität, die keine Bestätigung von außen braucht. Man neigt dazu, ihn zu unterschätzen. Daher setzt Klaus oft Understatement als Mittel für sich ein.

Gruppeninspektorin Penny Lanz (gespielt von Lilian Klebow) weiß, was sie will. Innerhalb des Teams der SOKO Wien hat sich Penny Lanz vor allem auf die Zusammenarbeit mit dem kriminaltechnischen Labor und der Gerichtsmedizin spezialisiert. Zudem kennt sie sich sehr gut im Internet aus. Penny Lanz ist über ihre frühere Assistentinnenrolle hinausgewachsen und leistet eigenständige, mitunter eigenwillige Ermittlungsarbeit.
Penny Lanz ist das jüngste Kind einer Wiener Großfamilie. Sie ist sehr sportlich und zuweilen ein bisschen keck. Mit ihren unkonventionellen Ermittlungsmethoden bereichert sie die SOKO Wien. Penny Lanz lässt sich von niemanden den Schneid abkaufen und stellt immer wieder ihre Kompetenz und vor allem ihre Schlagfertigkeit unter Beweis.

Die Frankfurter Pathologin Dr. Franziska "Franzi" Beck (gespielt von Maria Happel) hat sich kurz nach dem Tod ihrer großen Liebe um die frei gewordene Stelle einer Gerichtsmedizinerin in Wien beworben und diese aufgrund ihrer exzellenten Zeugnisse und Beurteilungen auch erhalten. Die zwangsläufig üppiger bemessene Freizeit eines Singles nutzt sie zu sportlicher und künstlerischer Betätigung. Eine Bowlingrunde und ein Frauenchor sind ihr im Laufe der Jahre zur Ersatzfamilie geworden.
Bei der Arbeit summt oder singt sie gedankenverloren alte Schlager aus der Vor- und Nachkriegszeit, was manches Mal zur Heiterkeit führt. Neben ihrer Schwäche fürs Essen zeichnet sie ihre Eigenwilligkeit und ihre resolute Art kontra zu geben aus.